北京组织研磨仪厂家告诉您组织研磨机怎样结合研磨珠来提取小鼠的DNA
1,首先将上海净信的组织研磨机上的制冷模块预先置于-20℃,使用时取出安装好.将研磨珠去RNA酶处理.
2,随机抽取小鼠的尾巴100μg,把样本剪成尽可能小段,置于无RNA酶的2研磨单位离心管中(选择耐液氮冷冻管子),同时加入1颗5号研磨珠和2颗3号研磨珠(如果选择1.5研磨单位离心管,只需要加入4-5颗3号研磨珠).
3,放置于液氮中一起浸泡3分钟,取出放置于预冷模块中,在全自动样品研磨仪上选择13单位频振研磨60s.(该步骤可以根据研磨的细微程度要求可以再重复一遍)
4,把研磨好的样本加入0.06ml的PBS0.14ml的RNAiso Plus(此处选择PBS,可以根据实验需要加入其他提取液,如1ml TRIzol等),继续置于研磨机上选择13单位频振研磨60s.样本将处于糊状.(其他提取试剂有可能会出现泡沫,不影响实验)
5,取出研磨管,放入冷冻离心机中,于4度,12000g离心10分钟
6,小心吸取上清液0.1ml至新的1.5研磨单位离心管中,盖上管盖,在室温上孵育15分种,使样品充分裂解至匀浆液较透明,如果仍有少量颗粒属于正常情况,不影响RNA提取质量和得率.
7,在1.5研磨单位离心管中加入0.02ml氯仿,盖紧管盖,振荡混匀并将其在冰上孵育15分种,于4度,12000g离心15分钟.离心后混合物分层:上清层,中间层,下层；RNA存在于上清层中.
8,将上清层小心转移到一干净的离心管中,加入等体积冰浴的异丙醇,颠倒振荡混匀,将混合的样品在-20度条件,孵育20分种,于4度,12000g离心10分钟.RNA沉淀通常形成片状沉淀附着于管壁或管底.
9,小心弃去上清,用1ML的冰浴75%的乙醇洗涤RNA沉淀一次,颠倒洗涤离心管管壁,并旋涡振荡样品,尽可能让沉悬浮,于4度,12000g离心5分钟,再次去除上清,晾干沉淀.
10,操作之后,在阴凉处适度干燥RNA沉淀(避免过分干燥,那样会降底它的可溶性).
11,用适量(一般可用0.01—0.02ml)的无RNA酶水或TE溶液来溶解RNA.抽提好的RNA,保存于-70度.
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